Вакол нас шмат неапетых герояў, якія здаюцца звычайнымі, але насамрэч маўкліва шмат нам спрыяюць.Пратэіназа K з'яўляецца «неапетым героем» у індустрыі малекулярнай дыягностыкі, хоць у параўнанні з «вялікай і магутнай» галіной пратэіназа K настолькі стрыманая, што мы доўга не заўважалі яе важнасці.З пачаткам новай кароннай эпідэміі попыт на пратэіназу K рэзка ўзрос, а пастаўкі ў краіне і за мяжой значна адстаюць ад спажывання, і ўсе раптам зразумелі, што пратэіназа K вельмі важная.
Чым карысная протеиназа К?
Пратэіназа К - гэта серын-пратэаза з актыўнасцю пратэялітычнага фермента і можа падтрымліваць актыўнасць у шырокім дыяпазоне асяроддзяў (рН (4-12,5), буфер з высокім утрыманнем солі, высокая тэмпература 70 °C і г.д.).Акрамя таго, актыўнасць пратэіназы К не інгібіруецца SDS, мачавінай, ЭДТА, гідрахларыдам гуанідыну, изотиоцианатом гуанідыну і г.д., і пэўная колькасць мыйнага сродкі можа таксама ўзмацніць актыўнасць пратэіназы К. Пры лячэнні (дэзінфекцыі вірусамі і мікробамі ), харчовая (размякчэнне мяса), скура (размякчэнне валасоў), вінаробства (асвятленне спіртам), падрыхтоўка амінакіслот (дэградаваныя пёры), экстракцыя нуклеінавых кіслот, гібрыдызацыя in situ і г.д., пратэіназа K Ёсць прымяненне.Часцей за ўсё выкарыстоўваецца экстракцыя нуклеінавых кіслот.
Пратэіназа K можа ферментаваць усе віды бялкоў ва ўзоры, у тым ліку тыя гістоны, якія цесна звязаны з нуклеінавымі кіслотамі, так што нуклеінавыя кіслоты могуць быць вызвалены з узору і выпушчаны ў экстракт, палягчаючы наступны этап экстракцыі і ачысткі.Пры выяўленні віруснай нуклеінавай кіслаты пратэіназа К з'яўляецца адным з важных кампанентаў у растворы для ўзяцця проб віруса.Пратэіназа К можа ўзламаць і інактываваць бялок абалонкі віруса, што больш бяспечна на этапе транспарціроўкі і выяўлення;акрамя таго, пратэіназа K можа таксама разбураць РНКазу, прадухіляе дэградацыю віруснай РНК і палягчае выяўленне нуклеінавых кіслот.
Начная слава пратэіназы К
Будзь то ў галіне навуковых даследаванняў або ў галіне IVD, экстракцыя нуклеінавых кіслот - гэта самы асноўны эксперымент, таму пратэіназа K заўсёды была вельмі важнай.Аднак у мінулым протеиназа K была значна менш вядомая, чым яе роля.Большая частка гэтага была таму, што суадносіны попыту і прапановы пратэіназы К былі вельмі стабільнымі.Мала хто можа падумаць, што пастаўкі протеиназы K будуць праблемай.
З пачаткам новай кароннай эпідэміі попыт на тэставанне нуклеінавых кіслот узрос.Па стане на канец чэрвеня 2020 года ў Кітаі было праведзена амаль 90 мільёнаў новых выпрабаванняў каронак, і гэтая лічба выклікае яшчэ большую трывогу ў сусветным маштабе.У эксперыментах па экстракцыі нуклеінавых кіслот рабочая канцэнтрацыя протеиназы K складае каля 50-200 мкг/мл.Як правіла, для экстракцыі ўзору нуклеінавай кіслаты патрабуецца каля 100 мкг протеиназы К.Пры рэальным выкарыстанні, для павышэння эфектыўнасці экстракцыі нуклеінавых кіслот, часта пратэіназа K будзе выкарыстоўвацца ў павялічанай колькасці.Выяўленне нуклеінавых кіслот новага каранавіруса выклікала вялікі попыт на пратэіназу К.Першапачатковы баланс попыту і прапановы пратэіназы K быў хутка парушаны, і пратэіназа K стала важным матэрыялам для прафілактыкі эпідэмій.
Цяжкасці ў выпрацоўцы протеиназы К
Нягледзячы на тое, што з развіццём эпідэміі важнае значэнне пратэіназы K было ацэнена людзьмі, няёмка, што з-за празмернай стрыманасці пратэіназы K мала айчынных кампаній было задзейнічана ў вытворчасці пратэіназы K. Калі людзі хочам наладзіць вытворчасць пратэіназы K. У працэсе вытворчасці было выяўлена, што пратэіназа K з'яўляецца надзвычай асаблівым бялком.Вельмі складана пашырыць вытворчыя магутнасці пратэіназы K за кароткі перыяд часу.
Шырокамаштабнае вытворчасць протеиназы К сутыкаецца з наступнымі цяжкасцямі
1. Нізкая экспрэсія
Пратэіназа K можа неспецыфічна разбураць большасць бялкоў і выклікаць сур'ёзную таксічнасць клетак-гаспадароў, якія экспрэсуюць.Такім чынам, узровень экспрэсіі протеиназы K звычайна вельмі нізкі.Скрынінг сістэм экспрэсіі і штамаў, якія высока экспрэсуюць пратэіназу К, звычайна патрабуе больш працяглага цыклу.
2. Рэшткі пігментаў і нуклеінавых кіслот
Шырокамаштабная ферментацыя ўводзіць вялікую колькасць рэшткаў пігмента і нуклеінавых кіслот гаспадара.Цяжка выдаліць гэтыя прымешкі простым працэсам ачысткі, а складаная ачыстка павялічвае кошт і зніжае хуткасць аднаўлення.
3. Нестабільнасць
Пратэіназа К недастаткова стабільная, яна можа энзимолизировать сябе, і яе цяжка стабільна захоўваць пры 37°C на працягу доўгага часу без ахоўнага агента.
4. Лёгка выпадае ў асадак
Пры падрыхтоўцы сублімавана высушанага парашка пратэіназы К, каб гарантаваць, што ўтрыманне цвёрдай рэчывы пратэіназы К у сублімавана высушаным парашку будзе вялікім, неабходна дадаць сублімавана высушаны ахоўны агент у высокай канцэнтрацыі, але калі канцэнтрацыя протеиназы K дасягае 20 мг/мл і вышэй, гэта лёгка Агрэгацыя ўтварае асадак, які прыносіць вялікія цяжкасці сублимационной сушцы протеиназы K з высокім утрыманнем цвёрдых рэчываў.
5. Вялікія інвестыцыі
Пратэіназа К валодае моцнай протеазной актыўнасцю і можа гідралізаваць іншыя пратэазы ў лабараторыі.Такім чынам, пратэіназа K патрабуе спецыялізаваных вытворчых плошчаў, абсталявання і персаналу для даследаванняў, распрацовак і вытворчасці.
Раствор протеиназы K XD BIOCHEM
XD BIOCHEM мае спелую платформу для экспрэсіі і ачысткі бялку, мае багаты вопыт у экспрэсіі і ачыстцы рэкамбінантных бялкоў і аптымізацыі вытворчых працэсаў.Дзякуючы хуткаму фарміраванню групы даследаванняў і распрацовак, шырокамаштабны працэс вытворчасці протеиназы K быў пераадолены.Штомесячная вытворчасць лиофилизированного парашка складае больш за 30 кг.Прадукт мае стабільную прадукцыйнасць, высокую ўдзельную актыўнасць ферментаў і не мае рэшткаў цытахромаў і нуклеінавых кіслот.Запрашаем звязацца з XD BIOCHEM Атрымаць пробны пакет (электронная пошта:sales@xdbiochem.comТэл.: +86 513 81163739).
Тэхнічныя рашэнні XD BIOCHEM ўключаюць
Выкарыстоўваючы шматкопійную інтэграцыю плазмід, адбіраюць штамы з высокай экспрэсіяй з узроўнем экспрэсіі 8 г/л, што дазваляе пераадолець праблему нізкага ўзроўню экспрэсіі пратэіназы К.
Дзякуючы ўсталяванню шматступеньчатага працэсу ачысткі рэшткі цытахрому і нуклеінавых кіслот пратэіназы К былі паспяхова выдалены ніжэй за стандартнае значэнне.
Дзякуючы высокапрадукцыйнаму скрынінгу складаў ахоўнага буфера быў абраны буфер, які можа стабільна захоўваць пратэіназу K пры 37°C.
Скрынінгавыя буферы пераадольваюць праблему лёгкасці агрэгацыі і асаджэння пратэіназы К пры высокіх канцэнтрацыях, і закладваюць аснову для сублімацыі пратэіназы К з высокім утрыманнем цвёрдых рэчываў.
Узор пратэіназы K XD BIOCHEM
Тэст на стабільнасць пратэіназы K XD BIOCHEM: не будзе істотных змен у актыўнасці пасля 80 дзён пры пакаёвай тэмпературы
Тэст на стабільнасць пратэіназы K XD BIOCHEM: не будзе істотных змен у актыўнасці пасля 80 дзён пры пакаёвай тэмпературы.
Параўнанне эфекту экстракцыі нуклеінавых кіслот XD BIOCHEM протеиназы K і канкуруючых прадуктаў.У працэсе экстракцыі нуклеінавых кіслот выкарыстоўваюцца адпаведна XD BIOCHEM і канкурэнтная протеиназа K.Эфектыўнасць экстракцыі протеиназы K XD BIOCHEM вышэй, а значэнне Ct гена-мішэні ніжэй.
Час публікацыі: 31 снежня 2021 г