Дитиотреитол (DTT) - гэта звычайна выкарыстоўваны аднаўляльнік, таксама вядомы як новая зялёная дабаўка.Гэта нізкамалекулярнае арганічнае злучэнне з дзвюма меркаптанавымі групамі (-SH).Дзякуючы аднаўляючым уласцівасцям і стабільнасці, DTT шырока выкарыстоўваецца ў біяхіміі і малекулярна-біялагічных эксперыментах.
Асноўная роля DTT - памяншэнне дысульфідных сувязяў у вавёрках і іншых біямалекулах.Дысульфідная сувязь з'яўляецца важнай часткай згортвання і стабільнасці бялку, але пры пэўных эксперыментальных умовах, такіх як аднаўляльны аналіз SDS-PAGE, рэкамбінацыя і згортванне бялку, неабходна паменшыць дысульфідную сувязь да дзвюх тыолавых груп, каб разгадаць прасторавую структуру бялку. бялок.DTT можа ўступаць у рэакцыю з дысульфіднымі сувязямі, аднаўляючы іх да меркаптанавых груп, адкрываючы такім чынам прасторавую структуру бялку і палягчаючы аналіз і маніпуляванне ім.
DTT таксама можна выкарыстоўваць для абароны актыўнасці і стабільнасці ферментаў.У некаторых рэакцыях, якія каталізуюцца ферментамі, актыўнасць фермента можа быць зніжана акісляльнікам.ДТТ можа ўступаць у рэакцыю з акісляльнікамі, ператвараючы іх у бясшкодныя рэчывы, тым самым абараняючы актыўнасць і стабільнасць фермента.
У параўнанні з традыцыйнымі аднаўляльнікамі, такімі як β-меркаптаэтанол (β-ME), DTT лічыцца больш бяспечным і стабільным аднаўляльнікам.Ён не толькі стабільны ў водным растворы, але і захоўвае свае аднаўленчыя ўласцівасці пры высокай тэмпературы і кіслотна-шчолачных умовах.
Выкарыстанне DTT адносна простае.Увогуле, DTT раствараюць у адпаведным буферы і затым дадаюць у эксперыментальную сістэму.Аптымальная канцэнтрацыя DTT павінна быць вызначана ў адпаведнасці з канкрэтным эксперыментам, і звычайна выкарыстоўваецца ў дыяпазоне 0,1-1 ммоль.Больш нізкія канцэнтрацыі могуць паменшыць неспрыяльны ўплыў на рост клетак і могуць знізіць цітатоксічнасць з-за празмернай экспрэсіі бялкоў-мішэняў.Больш высокія канцэнтрацыі могуць выклікаць празмерную метабалічную нагрузку клетак, уплываючы на рост клетак і эфектыўнасць экспрэсіі.
Спосаб вызначэння аптымальнай канцэнтрацыі можа заключацца ў ацэнцы ўзроўню экспрэсіі мэтавага бялку шляхам правядзення індукцыйных тэстаў IPTG пры розных канцэнтрацыях.Дробнамаштабныя культуральныя тэсты можна праводзіць з выкарыстаннем дыяпазону канцэнтрацый IPTG (напрыклад, 0,1 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ і г.д.), а эфект экспрэсіі пры розных канцэнтрацыях можна ацаніць шляхам выяўлення ўзроўню экспрэсіі бялку-мішэні (напрыклад, Вестэрн блот або флуарэсцэнтнае выяўленне).Па выніках эксперыменту ў якасці аптымальнай была выбрана канцэнтрацыя з найлепшым эфектам экспрэсіі.
Акрамя таго, вы таксама можаце звярнуцца да адпаведнай літаратуры або вопыту іншых лабараторый, каб зразумець звычайна выкарыстоўваны дыяпазон канцэнтрацыі IPTG у падобных эксперыментальных умовах, а затым аптымізаваць і наладзіць у адпаведнасці з эксперыментальнымі патрэбамі.
Важна адзначыць, што аптымальная канцэнтрацыя можа вар'іравацца ў залежнасці ад розных сістэм экспрэсіі, мэтавых бялкоў і эксперыментальных умоў, таму аптымізаваць лепш за ўсё ў кожным канкрэтным выпадку.
Такім чынам, ДТТ з'яўляецца звычайна выкарыстоўваным аднаўляльнікам, які можна выкарыстоўваць для памяншэння дысульфідных сувязяў у вавёрках і іншых біямалекулах і для абароны актыўнасці і стабільнасці ферментаў.Ён шырока выкарыстоўваецца ў эксперыментах па біяхіміі і малекулярнай біялогіі.
Час публікацыі: 28 верасня 2023 г