4-нітрафеніл бэта-D-галактапіраназід CAS: 200422-18-0

Эфект: ONPG — гэта субстрат, які спецыяльна выкарыстоўваецца для выяўлення прысутнасці і актыўнасці фермента β-галактазідазы. Калі фермент β-галактазідазы прысутнічае і актыўны, ён расшчапляе ONPG на два прадукты: о-нітрафенол і вытворнае галактозы. Вызваленне о-нітрафенолу прыводзіць да змены колеру ў жоўты колер, які можна вымераць з дапамогай спектрафатометра.

Ужыванне: ONPG мае некалькі прымяненняў у малекулярнай біялогіі і біяхіміі:

Вызначэнне актыўнасці β-галактазідазы: ONPG звычайна выкарыстоўваецца для вымярэння і колькаснай ацэнкі актыўнасці фермента β-галактазідазы. Хуткасць утварэння о-нітрафенолу, якая прама прапарцыйная актыўнасці фермента, можна вымераць спектрафатаметрычна.

Экспрэсія і рэгуляцыя генаў: ONPG часта выкарыстоўваецца ў эксперыментах, звязаных з даследаваннямі экспрэсіі і рэгуляцыі генаў. Ён часта выкарыстоўваецца ў аналізах зліцця бялкоў, такіх як звычайна выкарыстоўваная сістэма зліцця lacZ, для вывучэння экспрэсіі генаў пад кантролем пэўных прамотараў. Актыўнасць бэта-галактазідазы, вымераная з дапамогай ONPG, дае ўяўленне аб узроўні экспрэсіі генаў.

Скрынінг актыўнасці β-галактазідазы: ONPG можа быць выкарыстаны ў якасці каларыметрычнага метаду скрынінгу ў тэхналогіі рэкамбінантнай ДНК для вызначэння наяўнасці і функцыянальнасці гена LacZ, які кадуе β-галактазідазу. Гэты метад скрынінгу дапамагае ідэнтыфікаваць клоны, якія змяшчаюць цікавы ген.

Даследаванні кінетыкі ферментаў: ONPG таксама карысны пры вывучэнні кінетыкі фермента β-галактазідазы. Вымяраючы хуткасць рэакцыі фермент-субстрат пры розных канцэнтрацыях субстрата, можна вызначыць кінетычныя параметры, такія як канстанты Міхаэліса-Ментэн (Km) і максімальныя хуткасці рэакцыі (Vmax).