4-нітрафеніл бэта-D-галактопиранозид CAS: 200422-18-0

Эфект: ONPG - гэта субстрат, які спецыяльна выкарыстоўваецца для выяўлення прысутнасці і актыўнасці фермента β-галактозідазы.Калі фермент β-галактозидаза прысутнічае і актыўны, ён расшчапляе ONPG на два прадукты: о-нитрофенол і вытворнае галактозы.Вызваленне о-нітрафенолу прыводзіць да змены жоўтага колеру, якое можна вымераць з дапамогай спектрафатометра.

Ужыванне: ONPG мае некалькі прыкладанняў у малекулярнай біялогіі і біяхіміі:

Вызначэнне актыўнасці β-галактозидазы: ONPG звычайна выкарыстоўваецца для вымярэння і колькаснай ацэнкі актыўнасці фермента β-галактозидазы.Хуткасць адукацыі о-нитрофенола, якая прама прапарцыйная актыўнасці фермента, можа быць вымераная спектрафатаметрычна.

Экспрэсія і рэгуляцыя генаў: ONPG часта выкарыстоўваецца ў эксперыментах, звязаных з даследаваннямі экспрэсіі і рэгуляцыі генаў.Ён часта выкарыстоўваецца ў аналізах злітых бялкоў, такіх як звычайна выкарыстоўваная сістэма зліцця lacZ, для вывучэння экспрэсіі генаў пад кантролем спецыфічных прамотараў.Актыўнасць бэта-галактозидазы, вымераная з дапамогай ONPG, дазваляе зразумець узровень экспрэсіі генаў.

Скрынінг актыўнасці β-галактозидазы: ONPG можна выкарыстоўваць у якасці метаду каларыметрычнага скрынінга ў тэхналогіі рэкамбінантных ДНК для вызначэння наяўнасці і функцыянальнасці гена LacZ, які кадуе β-галактозидазу.Гэты метад скрынінга дапамагае ідэнтыфікаваць клоны, якія ўтрымліваюць цікавы ген.

Даследаванні кінетыкі ферментаў: ONPG таксама карысны для вывучэння кінетыкі фермента β-галактозидазы.Вымяраючы хуткасць рэакцыі фермент-субстрат пры розных канцэнтрацыях субстрата, можна вызначыць такія кінэтычныя параметры, як канстанты Міхаэліса-Ментэна (Km) і максімальныя хуткасці рэакцыі (Vmax).