Як вызначыць аптымальную канцэнтрацыю?
Для індуктара IPTG (ізапрапіл-бэта-d-тиогалактозид) чым вышэй канцэнтрацыя, тым лепш.Аптымальная канцэнтрацыя залежыць ад канкрэтных умоў эксперыменту і жаданага эфекту індукцыі.
Як правіла, канцэнтрацыя ИПТГ выкарыстоўваецца ў дыяпазоне 0,1-1 мМ.Больш нізкія канцэнтрацыі могуць паменшыць неспрыяльны ўплыў на рост клетак і могуць знізіць цітатоксічнасць з-за празмернай экспрэсіі бялкоў-мішэняў.Больш высокія канцэнтрацыі могуць выклікаць празмерную метабалічную нагрузку клетак, уплываючы на рост клетак і эфектыўнасць экспрэсіі.
Спосаб вызначэння аптымальнай канцэнтрацыі можа заключацца ў ацэнцы ўзроўню экспрэсіі мэтавага бялку шляхам правядзення індукцыйных тэстаў IPTG пры розных канцэнтрацыях.Дробнамаштабныя культуральныя тэсты можна праводзіць з выкарыстаннем дыяпазону канцэнтрацый IPTG (напрыклад, 0,1 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ і г.д.), а эфект экспрэсіі пры розных канцэнтрацыях можна ацаніць шляхам выяўлення ўзроўню экспрэсіі бялку-мішэні (напрыклад, Вестэрн блот або флуарэсцэнтнае выяўленне).Па выніках эксперыменту ў якасці аптымальнай была выбрана канцэнтрацыя з найлепшым эфектам экспрэсіі.
Акрамя таго, вы таксама можаце звярнуцца да адпаведнай літаратуры або вопыту іншых лабараторый, каб зразумець звычайна выкарыстоўваны дыяпазон канцэнтрацыі IPTG у падобных эксперыментальных умовах, а затым аптымізаваць і наладзіць у адпаведнасці з эксперыментальнымі патрэбамі.
Важна адзначыць, што аптымальная канцэнтрацыя можа вар'іравацца ў залежнасці ад розных сістэм экспрэсіі, мэтавых бялкоў і эксперыментальных умоў, таму аптымізаваць лепш за ўсё ў кожным канкрэтным выпадку.
Час публікацыі: 28 верасня 2023 г